肝豆状核变性基因是怎样的？肝豆状核变性（HLD）是一种铜代谢异常的常染色体隐性遗传病。若能早期诊断并正确治疗，可获良好效果；若诊断过晚，则严重影响预后［1］。因此，临床上急需能够早期诊断（包括症状前诊断）的方法，更为理想的是产前能诊断而避免患儿出生。

肝豆状核变性基因是怎样的？现已知基因突变检测能够客观地区分患者和杂合子，做到早期诊断、症状前诊断或产前诊断。目前国内外尚未有对儿童HLD基因突变研究的专门报道。为此，我们观察了8例儿童HLD患者P型ATP7B酶基因突变情况，比较与成人基因突变的差别，并分析其与临床表现型的关系。

肝豆状核变性基因是怎样的？国内外对于儿童肝豆状核变性基因突变情况尚未见专门研究，本研究针对儿童患者进行了检测。我们运用PCR-SSCP未测得第14外显子泳动变位。通过运用酶切及测序结果均证实第8外显子Arg778Leu突变为我们所检测样本的突变热点。

肝豆状核变性基因是怎样的？PCR-SSCP是简便有效的检测突变技术，单链DNA在非变性丙烯酰胺凝胶中，迁移率与一级序列密切相关，估计SSCP对突变检出率受到温度、甘油浓度、丙烯酰胺和甲叉丙烯酰胺浓度、缓冲液浓度等因素影响。运用两种或两种以上SSCP技术可提高突变检出率。我们运用4℃和20℃含10％甘油两种PCR-SSCP分析未发现第14外显子泳动变位，初步说明第14外显子点突变不是中国儿童HLD患者的基因突变热点。

肝豆状核变性基因是怎样的？运用限制性内切酶酶切技术筛查第8外显子，酶切结果准确、快速、简单，避免同位素污染。限制酶酶切可鉴别纯合子、杂合子、正常人。我们检出4例纯合子、1例杂合子，并分析1个家系证实其父母为杂合子。此技术所需设备简单，可用于临床筛查，但不能证实何种碱基突变，尚需测序证实。我们进行了DNA直接序列分析，结果在8例患儿中发现4例（来自3个不相关家系）发生第8外显子Arg778Leu纯合子突变，另1例Arg778Leu杂合子突变，证实与酶切结果相一致。

肝豆状核变性基因是怎样的？DNA直接序列分析中，双链DNA中一条链被生物素酰化（上游引物的5′端），其后这种一半被酰化的DNA结合于链霉抗生物素蛋白包被的磁珠。碱变性处理，使DNA链变性。通过磁场捕捉结合了生物素酰化DNA单链的磁珠，使之与另一条链分开。此单链可用作测序反应的模板。根据Sanger双脱氧法测序。本研究使用的DNA测序酶是DNA测序酶2.0版本（USB USA），不会由于错误掺入而导致测序结果错误。